難辨梭菌毒素 A/B 檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫熒光法）說明書

【產(chǎn)品名稱】 通用名稱：難辨梭菌毒素 A/B 檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫熒光法） 英文名稱：VIDAS C. difficile Toxin A&B

【包裝規(guī)格】 60 測試/盒

【預(yù)期用途】 本產(chǎn)品用于檢測人糞便樣本中的難辨梭菌毒素 A 和毒素 B。 采用兩步酶免夾心法與終點熒光檢測相結(jié)合技術(shù)（ELFA）用于 VIDAS 系列儀器對大便 標本中的難辨梭菌毒素 A 和毒素 B 進行檢測。 腸道正常菌群是抑制腸道內(nèi)病原菌大量繁殖的生物學(xué)屏障。由于抗生素的大量應(yīng)用破壞 了這種屏障保護作用，導(dǎo)致內(nèi)源性或醫(yī)院獲得性病原菌如難辨梭菌的大量繁殖。 已證實難辨梭菌是抗生素相關(guān)偽膜性腸炎(PMC)的主要病原菌。偽膜性腸炎(PMC)是一 種臨床常見的與長期大量應(yīng)用抗生素相關(guān)的綜合征。腸道的遠端部位乙狀結(jié)腸和直腸病變部 位可形成偽膜性結(jié)節(jié)和斑塊（1，2，3）。若偽膜性腸炎(PMC) 得不到及時診斷和治療，將 嚴重威脅病人生命。同時難辨梭菌也是抗生素相關(guān)性結(jié)腸炎和抗生素相關(guān)性腹瀉的病原菌 （4）。 難辨梭菌引起的醫(yī)院獲得性感染在某些醫(yī)院比較嚴重，易感人群常常是那些住院人數(shù)較 多的大型醫(yī)院病人,接受的病人和長期臥床病人（5，6，7）。同時,嬰幼兒和囊性纖維化 (CF) 病人也是無癥狀難辨梭菌攜帶者，嬰幼兒攜帶率可達 50%（8），囊性纖維化 (CF)病人達 32% （9）。 難辨梭菌相關(guān)性疾病 (CDAD) 有很多臨床診斷指標,一般包括 : 超過 36 小時有 6 次以 上未成形大便,抗生素應(yīng)用 8 周出現(xiàn)腹瀉癥狀，無明顯誘因的腹瀉以及藥物治療中出現(xiàn)的反 應(yīng)（10）。 難辨梭菌分為產(chǎn)毒株和非產(chǎn)毒株。產(chǎn)毒株一般同時產(chǎn)腸毒素(毒素 A)和細胞毒素(毒素 難辨梭菌毒素 A/B 檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫熒光法） 版本號 11733 H-CN- 2014/01 2 B)。 但難辨梭菌某些菌株（如血清型 F）僅產(chǎn) B 毒素，不產(chǎn) A 毒素。由于通常的實驗方法 僅檢測 A 毒素，則可能出現(xiàn)漏診（2，11）。 難辨梭菌毒素 A/B 檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）用于協(xié)助診斷難辨梭菌相關(guān)性疾病 (CDAD)。該試劑可檢測大便標本中的難辨梭菌毒素 A 和毒素 B（13）。

【檢驗原理】 檢測采用兩步酶免夾心法與終點熒光檢測相結(jié)合技術(shù)（ELFA）。 固相管(SPR)具有兩種作用：固相載體和加樣。檢測試劑隨時可用且預(yù)先加在了密封的 試劑條內(nèi)。 儀器自動完成 4 個檢測步驟。反應(yīng)液在 SPR 內(nèi)外循環(huán)數(shù)次。每步反應(yīng)后開始清洗循環(huán) 以除去未結(jié)合成份。 l 標本中的毒素 A 和/或 B 與 SPR 內(nèi)面包被的抗毒素 A 抗體（兔多克?。┖?B 抗體（鼠 單克隆）特異性結(jié)合。 l 毒素 A 與標記生物素的抗毒素 A 抗體（鼠單克隆）結(jié)合，毒素 B 與標記生物素的抗毒 素 B 抗體（鼠單克隆）合物。 l 堿性磷酸酶標記的鏈霉親和素與生物素共同孵育以檢測生物素。 l 檢測：堿性磷酸酶將底物（4-甲基傘形酮磷酸酯）水解為可用 450nm 波長檢測的熒光 產(chǎn)物（4-甲基傘形酮）。 熒光強度隨標本中毒素 A 和/或 B 的含量升高而升高。 難辨梭菌毒素 A/B(CDAB)檢測試驗完成后儀器自動分析結(jié)果，給出試驗值并打印每份 標本的結(jié)果。

【主要組成成分】 試劑盒組成：60 測試 60 個試劑條 （CDAB STR） STR 即用型。 60 個固相管 （CDAB SPR） （2 x 30） SPR 即用型。難辨梭菌兔多克隆抗毒素 A 抗體和小鼠單克 隆抗毒素 B 抗體。 1 瓶標準品 （CDAB S1） （1 x 4 mL） （液體） S1 0.05mol/l TRIS 緩沖液（pH7.2）+5% BSA+防腐劑稀釋 的難辨梭菌 A 毒素 1 瓶陽性對照品（CDAB C1） （1 x 4 mL） （液體） C1 0.05mol/l TRIS 緩沖液（pH7.2） +5%BSA +防腐劑稀 釋的難辨梭菌 A 毒素 難辨梭菌毒素 A/B 檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫熒光法） 版本號 11733 H-CN- 2014/01 3 試驗值范圍標在 MLE 數(shù)據(jù)上：對照品 C1（+）試驗值范 圍 1 瓶陰性對照品（CDAB C2） （1 x 4 mL） （液體） C2 0.05mol/l TRIS 緩沖液（pH7.2） +5%BSA +防腐劑 試驗值范圍標在 MLE 數(shù)據(jù)上：對照品 C2（-）試驗值范 圍 1 瓶陽性對照品（CDAB C3） （1 x 4 mL） （液體） C3 0.05mol/l TRIS 緩沖液（pH7.2） +5%BSA +防腐劑稀 釋的難辨梭菌 B 毒素 試驗值范圍標在 MLE 數(shù)據(jù)上：對照品 C3（+）試驗值范 圍 1 瓶標本稀釋液（CDAB R1） （1 x 61mL） （液體） R1 即用型。0.05mol/l TRIS 緩沖液（pH7.2） +50%小牛 血清+去污劑+ 防腐劑 校準試驗所需的出廠主體數(shù)據(jù)質(zhì)量標準 — MLE 數(shù)據(jù)（主批次錄入）提供于試劑盒中或從  網(wǎng)站下載。 — MLE 條形碼打印于盒標簽或從  網(wǎng)站下載。 1 份包裝說明書在試劑盒中或從  網(wǎng)站下載。 固相管（SPR）： SPR 內(nèi)壁包被抗難辨梭菌 A 毒素和抗難辨梭菌 B 毒素抗體。SPR 可通過 CDAB 標記識 別。從鋁箔袋中取出所需數(shù)量 SPR。用后務(wù)必密封好鋁箔袋。 試劑條（STR）: 試劑條由 10 個孔組成并用鋁箔密封。鋁箔上標有條形碼，內(nèi)容包括試劑代碼、試劑批 號、有效期等信息。第一孔未密封，用于加標本。最后一孔為透明小管用于讀取熒光值。中 間八孔內(nèi)含各種檢測試劑。 CDAB 試劑條成份 孔 試劑 1 標本孔 2-3-4 洗液: 0.05mol/L TRIS 緩沖液(pH 7.2)+去污劑+防腐劑(600uL) 5 標記物:生物素標記的鼠抗難辨梭菌 A 毒素抗體+生物素標記的鼠抗難辨梭菌 B 毒 素抗體+防腐劑 (400µL) 6 示蹤劑 : 堿性磷酸酶標記的鏈霉親和素+0.05 mol/L TRIS 緩沖液(pH 6.0) + 防腐 劑(400 µL) 7-8-9 洗液: 0.05 mol/L TRIS 緩沖液(pH 7.2) +去污劑+防腐劑(600 µL) 10 含底物的透明小管: 4-甲基傘形酮磷酸酯(0.6mmol/L)+二乙醇胺 DEA* (0.62mol/L 或 6.6%) pH9.2 + 1g/l 疊氮鈉 (300 µL) *刺激性試劑: - R 36:對眼睛有刺激性。 - S 26:如果接觸眼睛, 立即用大量清水沖洗并尋求醫(yī)生幫助。更多信息請參閱安全條例。 難辨梭菌毒素 A/B 檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫熒光法） 版本號 11733 H-CN- 2014/01 4 必需但試劑盒中未提供的材料和耗材 - 加樣槍帶一次性加樣頭，加樣量 300µL ，200µL 和 1000µL。 - 一次性無粉乳膠手套。 - 離心機，大于 12,000×g。 - 聚丙烯或其他合適的離心管，用于標本稀釋和離心(容量至少為 1.5 mL)。 - 標本移液管用于量取適量大便標本。 - 涂樣棒或涂樣環(huán) - 其它特殊材料和耗材，請參見儀器用戶手冊。 - VIDAS 系列儀器

【儲存條件及有效期】 ? 2～8℃儲存，有效期 12 個月。 ? 禁止冷凍試劑。 ? 所有未用試劑存于 2～8℃。 ? 打開試劑盒后,檢查 SPR 鋁箔袋密封是否完好且無損壞。否則,請勿使用 SPR。 ? 為保持 SPRs 穩(wěn)定性，取出所需 SPR 后請將有干燥劑的袋重新仔細密封并將整個試劑盒放 回 2～8℃。 ? 按推薦的環(huán)境儲藏試劑盒,可確保所有成份在標注的效期內(nèi)穩(wěn)定。

【適用儀器】 - VIDAS 系列儀器: VIDAS mini VIDAS VIDAS 3

【樣本要求】 標本類型、采集與儲存 根據(jù)實驗室標準程序采集大便標本并儲存于 2～8℃待處理。 標本采集后應(yīng)盡快送至實驗室。 難辨梭菌毒素 A/B 檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫熒光法） 版本號 11733 H-CN- 2014/01 5 大便標本制備前在 2～8℃可保存最多 3 天 (自采集之日起)，不會明顯損失難辨梭菌毒素 A/B。不建議在 2～8℃保存超過 3 天。標本在-25℃±6℃冷凍可保存 1 個月或-70℃（或更低 溫度）保存 1 個月以上。避免標本反復(fù)凍融。由于肛拭子采集標本量太少，不建議用此方 法。避免使用可能含去污劑、防腐劑或培養(yǎng)基的容器裝標本。因為這些成份會干擾難辨梭菌 毒素 A/B 的檢測結(jié)果。 制備 CDAB 試驗的標準、質(zhì)控和標本 標本 注意: 制備大便標本前充分混勻非常關(guān)鍵?；靹虿怀浞挚蓪?dǎo)致錯誤結(jié)果。為避免發(fā)生此問題， 必須混勻大便標本。稀釋的標本也必須混勻，有助于保證獲得可靠結(jié)果。 液體大便： 1、 通過移液管反復(fù)抽吸使大便均一化。 用移液管將 200µL 液體大便加入一清潔離心管中； 2、 使用帶有一次性吸頭的移液器，在離心管中加入 1000µL 標本稀釋液（R1）。 3、 通過移液管反復(fù)抽吸使大便再次均一化。 然后使用漩渦震蕩器*混勻。 確保標本與標本稀釋液（R1）*混勻。 4、 離心：2～25℃，最小 12,000 g，離心 5 分鐘。 5、 使用帶有一次性吸頭的移液器，取 300µL 上清用于 VIDAS 難辨梭菌毒素 AB 檢測。 注意:離心后如上清表面仍有顆粒物或脂肪，吸取上清時加樣頭應(yīng)伸入表面以下。 半固體和固體大便： 1、 為準確取 200mg 半固體或固體大便，首先取 200µL 蒸餾水加入一清潔離心管。此離心 管作為“參照管"。 2、 另取一清潔離心管作為標本管，用潔凈木棍挑取一定量大便（200mg）加入標本管，所 取大便體積與“參照管"液面相同即可。 注意：取完固體或半固體大便標本，可丟掉“參管"。 3、 取 1000µl 標本稀釋液（R1）加入標本管 4、 用漩渦震蕩器*混勻。標本與標本稀釋液（R1）一定要混勻。 5、離心：2～25℃，以最小 12,000 g 的速度離心 5 分鐘。 6、至少取 300µL 上清用于難辨梭菌毒素 A/B 檢測。 難辨梭菌毒素 A/B 檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫熒光法） 版本號 11733 H-CN- 2014/01 6 注意: - 離心后如上清表面仍有顆粒物或脂肪，吸取上清時加樣頭應(yīng)伸入表面以下。 - 如果半固體標本所含液體成份比固體成份多，標本制備可參考液體大便制備方法（見“標 本：液體大便） 標準和質(zhì)控： 標準和對照品： 標準品（S1）,陽性對照品（C1、C3）和陰性對照品(C2)必須與病人標本用相同的制備方法 處理。 1， 使用漩渦震蕩器混勻。 2， 使用帶有一次性吸頭的移液器收集 200ul 標準品或?qū)φ掌菲分翝崈綦x心管中。 3， 使用帶有一次性吸頭的移液器，吸取 1000ul 標本稀釋液（R1），加入離心管。 4， 使用漩渦震蕩器混勻。 5， 使用帶有一次性吸頭的移液器，吸取 300uµL 上清用于 VIDAS 難辨梭菌毒素 AB 檢測。 已制備標本的保存： 如不能立刻進行難辨梭菌毒素 AB 檢測，已制備的標本上清、標準和對照品可在 2～8℃保 存不超過 48 小時。 超過 48 小時的上清、標準和對照品必須丟棄。